摘要：［摘 要］目的 通过构建稳定表达细胞色素 Ｐ４５０酶（ＣＹＰ）２Ｃ１９的中国仓鼠卵巢（ＣＨＯ）细胞系，探讨异补骨 脂素的肝毒性机制。方法 使用 ＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅＴＭ２０００和 ｐｃＤＮＡ５／ＦＲＴＣＹＰ２Ｃ１９质粒构建 ＣＹＰ２Ｃ１９ＣＨＯ细胞 系，将细胞分为 ＦｌｐＩｎＴＭ ＣＨＯ组、ＶｅｈｉｃｌｅＣＨＯ组和 ＣＹＰ２Ｃ１９ＣＨＯ组；通过实时荧光定量 ＰＣＲ（ｑＲＴＰＣＲ）、 Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ、荧光素酶实验分别检测转染细胞中 ＣＹＰ２Ｃ１９的表达及酶活性；采用不同浓度异补骨脂素（０～ １００μｍｏｌ／Ｌ）处理 ＣＹＰ２Ｃ１９ＣＨＯ细胞及小鼠肝原代细胞，其中小鼠肝原代细胞另设对应浓度异补骨脂素 ＋噻氯 匹定（１０μｍｏｌ／Ｌ）组，使用 ＭＴＳ细胞增殖检测试剂盒（ＭＴＳ）和流式细胞术检测细胞毒性和凋亡，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检 测细胞中 Ｂ细胞淋巴瘤２（Ｂｃｌ２）、Ｂｃｌ２相关 Ｘ蛋白（Ｂａｘ）和切割后的半胱天冬酶３（ＣｌｅａｖｅｄＣａｓｐａｓｅ３）蛋白表 达水平。结果 与 ＶｅｈｉｃｌｅＣＨＯ组相比，ＣＹＰ２Ｃ１９ＣＨＯ组细胞中 ＣＹＰ２Ｃ１９的 ｍＲＮＡ和蛋白表达水平明显升高 （Ｐ＜０００１），酶活性明显增加（Ｐ＜０００１），表明 ＣＹＰ２Ｃ１９ＣＨＯ转基因细胞构建成功；异补骨脂素处理后，与 ＶｅｈｉｃｌｅＣＨＯ相比，ＣＹＰ２Ｃ１９ＣＨＯ细胞存活率明显降低（Ｐ＜０００１），细胞凋亡率明显增加（Ｐ＜０００１），Ｂａｘ和 ＣｌｅａｖｅｄＣａｓｐａｓｅ３蛋白表达明显增加（Ｐ＜０００１）、Ｂｃｌ２蛋白表达明显降低（Ｐ＜０００１）；异补骨脂素可明显诱导 小鼠肝原代细胞凋亡（Ｐ＜０００１），而噻氯匹定 ＋异补骨脂素组可明显拮抗该作用。结论 成功构建了稳定表达 ＣＹＰ２Ｃ１９的 ＦｌｐＩｎＴＭ ＣＨＯ细胞系，且异补骨脂素可能被 ＣＹＰ２Ｃ１９代谢活化从而诱导细胞凋亡，导致肝毒性。

摘要：［摘 要］目的 探讨黄芩苷对裸鼠体内淋巴瘤生长的影响及其潜在分子机制。方法 ２４只 ＦＯＸＮＹ移植瘤 小鼠均分为模型组、黄芩苷 １００ｍｇ／ｋｇ、２００ｍｇ／ｋｇ组及黄芩苷 ２００ｍｇ／ｋｇ＋铁死亡抑制剂 Ｆｅｒｒｏｓｔａｔｉｎ１（Ｆｅｒ１）组， 给药 １４ｄ，处死、称瘤重、测体积并计算抑瘤率，采用 ２′，７′二氯荧光黄双乙酸盐（ＤＣＦＨＤＡ）染色和酶联免疫吸 附测定（ＥＬＩＳＡ）法检测瘤组织中活性氧（ＲＯＳ）、还原型谷胱甘肽（ＧＳＨ）、丙二醛（ＭＤＡ）、铁离子及 ４羟基壬烯醛 （４ＨＮＥ）水平，采用苏木精伊红（ＨＥ）染色法观察肿瘤组织形态学特征，采用碘化丙啶（ＰＩ）染色及免疫组织化 学法检测肿瘤细胞死亡率及增殖相关抗原（Ｋｉ６７）、磷酸化核因子 Ｅ２相关因子 ２（ｐＮｒｆ２）、血红素氧合酶１（ＨＯ １）、ＧＳＨ过氧化物酶 ４（ＧＰＸ４）蛋白表达。结果 与模型组比较，黄芩苷组小鼠肿瘤质量和体积、ＧＳＨ含量及 Ｋｉ６７、ｐＮｒｆ２、ＨＯ１、ＧＰＸ４阳性率降低，ＲＯＳ、ＭＤＡ、铁离子、４ＨＮＥ含量、细胞死亡率及抑瘤率升高，且呈剂量依赖性 （Ｐ＜００５）；与黄芩苷 ２００ｍｇ／ｋｇ组比较，黄芩苷 ２００ｍｇ／ｋｇ＋Ｆｅｒ１组小鼠上述指标均逆转（Ｐ＜００５）。结论 黄 芩苷可抑制淋巴瘤移植小鼠的肿瘤生长，其机制可能与抑制 Ｎｒｆ２／ＨＯ１通路和促进肿瘤组织铁死亡有关。

摘要：［摘 要］目的 探讨消癥方延缓慢性肾脏病（ＣＫＤ）进展的临床疗效及潜在作用路径。方法 １４３例 ＣＫＤ患 者分为对照组（ｎ＝７３，常规西医治疗）和消癥方组（ｎ＝７０，常规西医 ＋消癥方治疗），治疗 １２个月，收集两组 ＣＫＤ患者入组当天（基线）的一般临床资料，抽取基线及治疗后 ６、１２个月时空腹静脉血检测肾功能指标［血清 肌酐（Ｓｃｒ）、尿白蛋白／肌酐比（ｕＡＣＲ）并计算肾小球滤过率（ｅＧＦＲ）、ΔｅＧＦＲ］和血清指标［超氧化物歧化酶 （ＳＯＤ）、一氧化氮（ＮＯ）、转化生长因子 β１（ＴＧＦβ１）、吲哚硫酸（ＩＳ）、丙二醛（ＭＤＡ）、谷胱甘肽过氧化物酶 （ＧＳＨＰＸ）及中性粒细胞／淋巴细胞比值（ＮＬＲ），并计算上述指标的差值 Δ］，记录治疗后 １２个月内两组 ＣＫＤ患 者 ＣＫＤ进展事件的发生情况、不良事件及消方组患者的用药、依从性，采用 ｌｏｇｉｓｔｉｃ回归分析 ＣＫＤ进展事件的 影响因素，采用中介效应模型分析 ＳＯＤ、ＮＯ、ＴＧＦβ１及 ＩＳ变化在消方治疗与 ＣＫＤ进展之间的潜在中介作用。 结果 治疗后 １２个月，消方组 ＣＫＤ患者 ΔｅＧＦＲ优于对照组，ＣＫＤ进展事件率低于对照组（Ｐ＜０．００１）；ＳＯＤ 升高，ＮＯ、ＴＧＦβ１及 ＩＳ变化优于对照组（均 Ｐ＜０．０５）；ｌｏｇｉｓｔｉｃ回归显示，消方使用为 ＣＫＤ进展独立保护因素 （Ｐ＜０．００１）；多路径中介分析显示，纳入中介模型的各血清指标的间接效应无统计学意义（Ｐ＞０．０５），但直接效 应有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。结论 消癥方联合西医常规治疗可延缓 ＣＫＤ患者的病情进展，其机制可能与抗氧 化、内皮功能及纤维化相关指标改善有关。

摘要：［摘 要］目的 探讨黄芩苷通过甲基转移酶样蛋白 ３（ＭＥＴＴＬ３）调控 Ｎ６ 甲基腺苷（ｍ６ Ａ）甲基化修饰及其对 结肠癌细胞 ＳＷ４８０恶性行为学的影响。方法 对数期 ＳＷ４８０细胞分为对照组、黄芩苷组、低表达 ＭＥＴＴＬ３组、 过表达 ＭＥＴＴＬ３组及黄芩苷 ＋过表达 ＭＥＴＴＬ３组，细胞计数试剂盒８（ＣＣＫ８）试剂盒检测细胞存活率，Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ与实时荧光定量聚合酶链反应（ＲＴｑＰＣＲ）检测 ＭＥＴＴＬ３蛋白与信使 ＲＮＡ（ｍＲＮＡ）水平，Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ法和平板 克隆实验检测细胞侵袭能力和克隆能力，甲基化 ＲＮＡ免疫沉淀联合实时荧光定量聚合酶链反应（ＭｅＲＩＰｑＲＴ ＰＣＲ）检测 ｍ６ Ａ甲基化修饰水平。结果 黄芩苷呈浓度依赖性抑制 ＳＷ４８０细胞存活率，下调 ＭＥＴＴＬ３的 ｍＲＮＡ 及蛋白表达，确定 ５０μｍｏｌ／Ｌ为半数抑制浓度，进行后续实验浓度；与对照组相比，黄芩苷组与低表达 ＭＥＴＴＬ３ 组 ＳＷ４８０细胞 ＭＥＴＴＬ３蛋白及 ｍＲＮＡ表达、细胞克隆及侵袭细胞数量、ｍ６ Ａ甲基化修饰水平均降低（Ｐ＜００５）； 与黄芩苷组相比，低表达 ＭＥＴＴＬ３组上述指标均降低（Ｐ＜００５），过表达 ＭＥＴＴＬ３组变化与低表达 ＭＥＴＴＬ３组相 反，且黄芩苷 ＋过表达 ＭＥＴＴＬ３组各指标变化较过表达 ＭＥＴＴＬ３组减少、但高于黄芩苷组（Ｐ＜００５）。结论 黄 芩苷可改善结肠癌细胞 ＳＷ４８０恶性行为学，其机制可能与通过抑制 ＭＥＴＴＬ３介导的 ｍ６ Ａ甲基化修饰水平有关。

摘要：［摘 要］目的 探讨养心络胶囊对心力衰竭（ＨＦ）患者外周血巨噬细胞代谢重编程的调控作用及其对炎症 反应、心功能和安全性的影响。方法 １２０例 ＨＦ患者随机均分为对照组（常规治疗，ｎ＝６０）和观察组（常规治 疗联合养心络胶囊，ｎ＝６０），疗程均为 １２周，采集治疗前后外周血、分离趋化因子受体 ２阳性（ＣＣＲ２＋）单核细胞 并诱导分化为巨噬细胞，采用实时荧光定量聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）检测巨噬细胞中糖酵解相关基因信使 ＲＮＡ （ｍＲＮＡ）的表达水平，Ｓｅａｈｏｒｓｅ细胞能量代谢分析仪检测巨噬细胞中氧消耗率（ＯＣＲ）和胞外酸化率（ＥＣＡＲ）；检 测两组患者治疗前后的心功能指标［左室射血分数（ＬＶＥＦ）、Ｎ末端 Ｂ型利钠肽前体（ＮＴｐｒｏＢＮＰ）、ＮＹＨＡ分级 并计算其改善率）］水平，酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）检测血清炎症因子水平；治疗后随访 ６个月，记录心功能变化 及不良事件发生情况。结果 治疗后 ３个月，两组患者 ＬＶＥＦ升高、ＮＴｐｒｏＢＮＰ下降、ＮＹＨＡ分级改善，且观察组 改善程度优于对照组（Ｐ＜００５）；ＣＣＲ２＋巨噬细胞葡萄糖摄取率、ＥＣＡＲ及糖酵解相关基因 ｍＲＮＡ表达下降， ＯＣＲ升高，血清炎症因子水平均下降，且观察组变化幅度均优于对照组（Ｐ＜００５）；两组患者不良反应发生率比 较，差异无统计学意义（χ ２＝０１９６，Ｐ＝０６５８）。结论 养心络胶囊可抑制 ＨＦ患者外周血 ＣＣＲ２＋巨噬细胞代谢 重编程，降低炎症反应，改善心功能且具有良好安全性。

摘要：［摘 要］目的 探讨叉头框 Ｄ３反义 ＲＮＡ１（ＦＯＸＤ３ＡＳ１）在低级别胶质瘤（ＬＧＧ）恶性转化中的调控机制。 方法 公共数据库数据分析 ＦＯＸＤ３ＡＳ１在胶质瘤细胞中的表达差异，实时荧光定量聚合酶链式反应（ｑＰＣＲ）验 证其在胶质瘤细胞系中的表达水平；构建 ＦＯＸＤ３ＡＳ１过表达细胞，采用细胞计数试剂（ＣＣＫ８）、Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ及划 痕实验分别检测细胞活性、侵袭及迁移能力，采用免疫印迹法（Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ）和 ｑＰＣＲ检测上皮间质转化（ＥＭＴ） 相关蛋白及靶向微小 ＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）的表达；结合 ＧＥＰＩＡ分析、双萤光素酶报告基因实验验证 ＦＯＸＤ３ＡＳ１与 ｍｉＲ１４０５ｐ及下游血管内皮生长因子 Ａ（ＶＥＧＦＡ）的靶向关系；血管形成实验检测其对人脐静脉内皮细胞微血管 形成，裸鼠模型评估其对肿瘤生长和血管生成的作用。结果 ＦＯＸＤ３ＡＳ１在胶质瘤中的表达高于正常组（Ｐ＜ ００５）；与对照组相比，过表达 ＦＯＸＤ３ＡＳ１可增强胶质瘤细胞活性、侵袭及迁移能力（Ｐ＜００５），下调 ｍｉＲ１４０ ５ｐ表达，促进 ＥＭＴ进程；同时上调 ＶＥＧＦＡ表达，增强微血管形成能力（Ｐ＜００１）；裸鼠模型结果显示，过表达 ＦＯＸＤ３ＡＳ１组的肿瘤体积以及血管生成能力增强（Ｐ＜００１）。结论 过表达 ＦＯＸＤ３ＡＳ１可增强 ＬＧＧ细胞的侵 袭和迁移能力，促进 ＥＭＴ进程和血管生成，共机制与调控 ｍｉＲ１４０５ｐ／ＶＥＧＡ激活 ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ途径有关。

摘要：［摘 要］目的 探究工厂制作与手工制作对贵州酸汤微生物群落及代谢功能的影响，解析不同生产方式下 核心菌群与差异菌群（即分组特征微生物标志物）的差异化响应特征。方法 采集贵州 ４个地区共 １０份酸汤样 品，通过分离纯化及宏基因组学测序，比较两种制作方式的微生物差异。结果 分离纯化显示，手工制作酸汤中 筛选到植物乳植杆菌（Ｌ．ｐｌａｎｔａｒｕｍ）、副干酪乳酪杆菌（Ｌ．ｐａｒａｃａｓｅｉ）等；工厂制作酸汤中筛选到 Ｌ．ｐｌａｎｔａｒｕｍ等； 宏基因组学表明，不同工艺下发酵菌群的丰富度和多样性相对稳定。工厂制作优势菌为耐酸乳杆菌（Ｌ．ａｃｅｔｏｔｏｌ ｅｒａｎｓ，１５４％）、洛旺醋杆菌（Ａｌｏｖａｎｉｅｎｓｉｓ，７８３％）；手工制作为 Ｌ．ｐｌａｎｔａｒｕｍ（１２６％）、Ｌ．ｐａｒａｃａｓｅｉ（７１２％）；差 异判别分析（ＬＥｆＳｅ）显示工厂制作差异菌群为假单胞菌属等环境来源微生物，手工制作为乳酸菌相关菌群； ＫＥＧＧ功能注释表明，手工制作富集芳香化合物降解和次级代谢合成通路；工厂制作样品中富集了与真核微生 物功能基因相关的 ＫＥＧＧ通路（如 ＭＡＰＫｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙｙｅａｓｔ和 ｃｅｌｌｃｙｃｌｅｙｅａｓｔ），该富集仅反映样品中真菌基 因拷贝数较高，不代表真菌群落处于活跃增殖状态。结论 生产方式主要影响酸汤中差异菌群的种类和丰度、 优势种丰度及代谢特征，未改变以乳酸菌为核心的微生态基础；工厂制作样品中检测到较高相对丰度的环境微 生物类群（如假单胞菌属、不动杆菌属）。